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生物負(fù)荷測試的目的及步驟

更新時(shí)間:2025-08-21  |  點(diǎn)擊率:987

生物負(fù)荷測試
生物負(fù)荷:制藥與醫(yī)材安全的關(guān)鍵角色

生物負(fù)荷 (Bioburden),也稱為生菌數(shù)或負(fù)荷菌,通常指的是產(chǎn)品、原材料或表面上存在的活體微生物總數(shù)量 (如細(xì)菌、真菌、病毒等)。它能有效評估和控制產(chǎn)品的微生物含量,不僅是確保產(chǎn)品質(zhì)量的基石,更是保障患者與消費(fèi)者安全的關(guān)鍵。

為什么生物負(fù)荷測試很重要?

生物負(fù)荷測試 (Bioburden testing),又稱為生菌數(shù)測試 (total viable count, TVC) 或微生物限度(量)測試 (microbial limit testing),是制藥與醫(yī)療產(chǎn)業(yè)中關(guān)鍵的質(zhì)量控制過程 (quality control, QC),用于偵測及量化產(chǎn)品在滅菌前的活體微生物含量,能夠反映原料質(zhì)量、生產(chǎn)流程潔凈度、污染控制狀況,并作為制定滅菌參數(shù)及驗(yàn)證滅菌效果的依據(jù)。
全球主要法規(guī)機(jī)構(gòu),如美國食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA) 和國際標(biāo)準(zhǔn)化組織 (ISO),都明確要求需執(zhí)行生物負(fù)荷測試。例如:

· ISO 11737-1:被廣泛用作醫(yī)療器材的生物負(fù)荷測試標(biāo)準(zhǔn),并被歐盟醫(yī)療器材法規(guī) (EU MDR) 和 美國食品藥物管理局 (FDA 510 (k)) 認(rèn)可為共識(shí)標(biāo)準(zhǔn)。
· 美國藥典USP<61>,<62>,<1115>:涵蓋非無菌產(chǎn)品 (nonsterile products) 微生物限度與控制策略。
生物負(fù)荷測試被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療器材、制藥、生物制劑和食品與保健品等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)業(yè),做為確保產(chǎn)品安全與法規(guī)合規(guī)的關(guān)鍵步驟。

生物負(fù)荷測試的目的及步驟


生物負(fù)荷測試一般在最終滅菌程序 (terminal sterilization) 前、或在無菌制程 (aseptic processing) 中「無菌過濾或充填步驟」前進(jìn)行。測試結(jié)果所反映的微生物含量,即為整體制程潔凈度的指標(biāo)。因此,生物負(fù)荷測試被視為制程潔凈驗(yàn)證與污染控制策略中的關(guān)鍵步驟,其代表意義如下:

· 滅菌策略設(shè)定:
微生物的數(shù)量及類型會(huì)直接影響最終滅菌的有效性。如果生物負(fù)荷過高,即使按照標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行滅菌,也可能無法wanquan殺死所有微生物。因此,生物負(fù)荷水平越低,產(chǎn)品越容易滅菌。
· 質(zhì)量管理及控制:
透過定期監(jiān)測生物負(fù)荷水平能確認(rèn)制程潔凈度是否穩(wěn)定、指出制程中的破口,并且使最終產(chǎn)品的微生物含量符合規(guī)范范圍內(nèi)。
· 風(fēng)險(xiǎn)評估:
生物負(fù)荷有助于評估產(chǎn)品對患者或消費(fèi)者的潛在感染風(fēng)險(xiǎn)。特別是醫(yī)療器材,若無法有效控制生物負(fù)荷,可能導(dǎo)致醫(yī)療相關(guān)感染 (Healthcare-associated infections, HAIs)。其特性分析有助于了解內(nèi)毒素 (endotoxin) 的存在,即使滅菌成功,部份細(xì)菌仍會(huì)釋出內(nèi)毒素,對患者健康造成潛在風(fēng)險(xiǎn)。
· 法規(guī)要求:
許多國家和地區(qū)的法規(guī),例如 ISO 11737-1,都要求醫(yī)療器材和藥品制造商定期進(jìn)行生物負(fù)荷測試,以符合相關(guān)的質(zhì)量和安全標(biāo)準(zhǔn)。

生物負(fù)荷的來源是什么? 如何控制負(fù)荷菌 (bioburden control) ?

微生物 (microbial) 可透過多種管道進(jìn)入產(chǎn)品或原料中。從原物料、人員、設(shè)備,乃至整個(gè)制造過程,都必須透過嚴(yán)格監(jiān)控,使滅菌程序發(fā)揮最大功效,制成使用安全無虞的產(chǎn)品。
常見的生物負(fù)荷來源及控制方式如下表所示:

來源控制方式
原材料對原材料進(jìn)行微生物檢測和控制
制造環(huán)境維持潔凈的生產(chǎn)環(huán)境,例如:使用無塵室、空氣過濾系統(tǒng)等
人員穿著無菌服裝,并遵守嚴(yán)格的衛(wèi)生程序
設(shè)備與工具定期對設(shè)備和工作表面進(jìn)行cedi清潔和消毒
制造過程遵守?zé)o菌操作規(guī)范,并選擇產(chǎn)品合適的滅菌方法










常見的生物負(fù)荷試驗(yàn)流程及方法?

生物負(fù)荷測試的目的及步驟

1. 收集樣品與處理:
依檢品之物理特性選用適用的前處理方式,取得待測檢液。若無適用方法,則應(yīng)建立適當(dāng)之替代序程。

樣品檢液配制
水溶性檢品以適當(dāng)緩沖液或培養(yǎng)基溶解
非油性不溶于水檢品以適當(dāng)緩沖液或培養(yǎng)基溶解,可添加界面活性劑
油性檢品檢品溶解于適當(dāng)酯類溶劑,再以預(yù)熱稀釋液稀釋檢品
噴霧式液體/固體檢品將容器中檢品移入微孔濾膜過濾裝置
貼片檢品具有黏性之面朝上放在無菌容器中,覆蓋無菌多孔材料,再將貼布移入適當(dāng)稀釋液中,振蕩至少30分鐘














2. 選擇適合的測試方法:
為了量化負(fù)荷菌,目前主流有四種定量分析方法,包含微孔濾膜過濾法 (Membrane Filtration Method)、傾注培養(yǎng)法 (又稱混合稀釋法,Pour Plate Method)、表面涂布法 (又稱涂抹法,Spread Plate Method) 以及多重試管法 (又稱最確數(shù)法,Most-Probable-Number, MPN),請根據(jù)檢液特性選用適合的測試方法:


微孔濾膜過濾法(Membrane Filtration Method)培養(yǎng)皿法 / 平板法
(Plate Count Methods)
多重試管法
(Most-Probable-Number, MPN)
傾注平板法
(Pour Plate Method)
表面涂布法
(Spread Plate Method)
原理檢液以 0.45 μm 濾膜過濾后,將濾紙置于培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng)將檢液與未凝固之培養(yǎng)基一起倒入培養(yǎng)皿中,進(jìn)行培養(yǎng)將檢液涂抹于培養(yǎng)基中,進(jìn)行培養(yǎng)將檢液進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)10倍之序列稀釋,進(jìn)行培養(yǎng)
適合樣品可過濾之大量液態(tài)、生物負(fù)荷較低的樣品無法過濾之樣品,如凝膠、黏膠物質(zhì)等無法過濾之少量樣品生物負(fù)荷極低的產(chǎn)品
適用熱敏感物質(zhì)
準(zhǔn)確度
培養(yǎng)時(shí)間約 5~7 天約 3~7 天約 3~7 天約 3~7 天
結(jié)果單位菌落形成單位
(CFU)
菌落形成單位
(CFU)
菌落形成單位
(CFU)
依最確數(shù)表推估

*


















一般認(rèn)為多重試管法 (MPN) 是最不準(zhǔn)確的方法,因此本法僅于無其他方法適用時(shí)才予選用。

3. 結(jié)果判定:
根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判定產(chǎn)品是否符合法規(guī)標(biāo)準(zhǔn),或用以評估最終滅菌所需之水平。

其中,微孔濾膜過濾法不僅是最常見的生物負(fù)荷檢測方法之一,也可以移除檢體中的干擾物質(zhì)。若待測樣品中含有抑制微生物的生長與繁殖的成分,如抗菌劑 (antimicrobial agent) 或其他具抑菌活性 (antibacterial activity) 的成分,可能會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偽陰性 (即樣品中實(shí)際存在微生物,但因生長受抑制而未被檢出)。因此,當(dāng)檢體特性適合以微孔濾膜過濾法操作時(shí),該方法常被視為進(jìn)行生物負(fù)荷試驗(yàn)的shouxuan技術(shù)。其方法是將檢液通過 0.45 μm 的濾膜,捕捉大于孔徑的微生物,再將濾膜轉(zhuǎn)置至適當(dāng)培養(yǎng)基中培養(yǎng),觀察菌落生長情形。

為加速過濾流程,洛科/ROCKER 提供多款真空過濾系統(tǒng) (vacuum filtration system),皆兼容 0.45 μm 濾膜,并可搭配不銹鋼、塑料材質(zhì)漏斗,專為生物負(fù)荷測試設(shè)計(jì)。

生物負(fù)荷試驗(yàn)最佳shouxuan:多連真空過濾系列,提升通量及效率

洛科 Multi  Vac 301 – MB – A
多連真空過濾系統(tǒng)
洛科 SolarVac 1201 – MB – T
旋轉(zhuǎn)多連真空過濾系統(tǒng)

生物負(fù)荷測試的目的及步驟

生物負(fù)荷測試的目的及步驟

· 直接排水設(shè)計(jì)、省空間、省時(shí)間
· 極速拆裝設(shè)計(jì),SS316 不銹鋼制作
· zhuan利旋卡緊扣設(shè)計(jì)
· 可選擇三連、六連座
· 旋轉(zhuǎn)盤設(shè)計(jì)方便操作,避免交叉污染
· 大容量 PP 真空瓶含可快速直接排廢液
· SS316 及硅膠材質(zhì),可高溫高壓滅菌
· 可選擇六連、十二連座














「生物負(fù)荷試驗(yàn) 」與「 無菌試驗(yàn) 」的差異?

生物負(fù)荷試驗(yàn) (bioburden testing) 與無菌試驗(yàn) (sterility testing) 是醫(yī)療器材和制藥行業(yè)中,確保產(chǎn)品無菌性的兩個(gè)不同但相關(guān)的測試,其目的、執(zhí)行時(shí)機(jī)和方法有所不同。


生物負(fù)荷試驗(yàn)
(bioburden testing)
無菌試驗(yàn)
(sterility testing)
目的量化并監(jiān)控制程中的活體微生物總量確定最終產(chǎn)品的無菌性
執(zhí)行時(shí)機(jī)產(chǎn)品最終滅菌前的制程中設(shè)立檢查點(diǎn)產(chǎn)品經(jīng)最終滅菌后
操作環(huán)境一般層流柜 (laminar flow)無菌檢測隔離器 (Isolator)


潔凈度 Class 100 (a ji)
測試方法微孔濾膜過濾法
傾注平板法
表面涂布法
多重試管法
微孔濾膜過濾法
直接接種法
測試對象未經(jīng)滅菌前的產(chǎn)品
非要求無菌之產(chǎn)品
最終產(chǎn)品
要求無菌之產(chǎn)品
樣器類型藥品 (固體及液體)藥品 (固體及液體)
醫(yī)療器材
測試結(jié)果CFU 數(shù)值 (微生物含量)是/否無菌
結(jié)果應(yīng)用評估滅菌劑量和參數(shù);微生物監(jiān)測和趨勢分析、制程風(fēng)險(xiǎn)評估驗(yàn)證產(chǎn)品無菌性,最終放行產(chǎn)品的依據(jù)之一
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)ISO 11737-1
USP<61>
USP<62>
ISO 11737-2
USP<71>
中華藥典(7007.1) 微生物計(jì)數(shù)法
(7007.2) 特定微生物檢驗(yàn)法
(7001) 無菌試驗(yàn)法



























總體而言,生物負(fù)荷試驗(yàn)是預(yù)防性和制程控制的工具,用以了解和管理產(chǎn)品在滅菌前的微生物含量信息;而無菌試驗(yàn)則是驗(yàn)證性和質(zhì)量保證的工具,目的為確認(rèn)最終產(chǎn)品在經(jīng)過滅菌處理后是否符合無菌要求

應(yīng)用

1、 醫(yī)療器材產(chǎn)業(yè):如手術(shù)刀片、導(dǎo)管、縫線、人工關(guān)節(jié)等
2、制藥產(chǎn)業(yè):無菌注射劑、藥品原料、生物制劑 (疫苗、抗體、細(xì)胞治療產(chǎn)品) 等
3、食品產(chǎn)業(yè):食品廠環(huán)境監(jiān)控、水樣監(jiān)測等
4、化妝品:產(chǎn)品原料



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